●DUS田間表型鑒定是對申請保護的植物新品種進行特異性、一致性和穩定性的栽培鑒定試驗或室內分析測試的過程。測試方法是將申請品種與近似品種在相同的生長條件下,從植物的種子、幼苗、開花期、成熟期等各個階段對多個質量性狀、數量性狀及抗病性等作出觀察記載,并與近似品種進行結果比較。
●DNA室內基因型鑒定是一項生物學檢測技術,以玉米為例,玉米有總數約為30億個堿基對的DNA,每個品種的DNA都不完全相同,品種與品種之間不同的堿基對數目達幾百萬之多,因此通過分子生物學方法顯示的DNA圖譜也有差異,由此可以識別不同的品種。
如果將100個品種撕掉標簽和包裝,通過種子形態或者田間種植進行形態觀察讓它們一一對號入座,辨別出分別是什么品種,我想幾乎沒有人能夠做到,那成千上萬個品種就更不可能做到了。但利用DNA指紋技術識別這些品種就輕而易舉了,一天就可以完成。“這就是DNA鑒定技術既準確可靠,又經濟快捷的優勢。”北京市農林科學院玉米研究中心主任趙久然的信心來自于他們團隊20余年持之以恒的關于玉米標準DNA技術的研究與應用。
農業部辦公廳日前發布了《農作物品種DNA身份鑒定體系構建實施方案》,明確了農作物品種DNA身份鑒定體系構建的重要意義和發展方向。
且說快和準
難以想象僅2014年一年時間里,玉米中心做過的DNA指紋檢測鑒定樣本量達1萬多份。“正常程序是7個工作日之內出結果,加急樣品48小時內出結果。”檢測中心王鳳格博士說,“無論是已審定的、參加過區試的,還是提交品種權保護的品種,凡是在玉米中心做過檢測的,其‘指紋’和痕跡就會永久留存了。目前,這個標準指數庫已經保存了2萬多個玉米標準DNA指紋信息,未來還會進一步擴容。”
人類DNA鑒定技術的應用也有近20年了,通過人的DNA檢測可以進行親子鑒定,更可以用于刑事偵查中的DNA比對,已經成為公安機關有效的破案利器。作物與人都屬于生物,遺傳信息載體都是DNA,很多技術是相通的,但也有不同之處。趙久然解釋,在人類DNA檢測結果判別上,引入最大似然率概念,就是說兩個樣本的DNA鑒定結果完全一樣,也存在著極小概率不是同一個人的可能性。而在玉米品種判定中,沒有使用“最大似然率”這個概念,采用了“高度近似”這個概念。就是說如果兩個品種的DNA鑒定結果相同,其判定結論是“相同或高度近似”,有可能不同,但即使有些許差異,這種差異也是很小的,頂多屬于派生品種范疇。如果把兩個品種種在一起,連育種者自己都分不清哪個是他育成的品種,還能說那是一個新品種嗎?“同”是相對的,“不同”是絕對的,沒有兩個絕對相同完全一樣的事物,關鍵是確定和把握好尺度。
遏制“仿冒套”
有人說“市場上至少1/3的種子是假冒的。”有人感慨“新品種培育六七年,仿冒才幾天。”業內認為“仿冒套”傷的是種業創新力,呼吁通過DNA身份鑒定這項技術支撐,能夠對“仿冒套”起到遏制作用,鼓勵真正的品種創新,引導市場走向自律。
人靠相貌等可以辨別,而DNA鑒定是最終途徑。農作物也是一樣,由于少數具備高產、廣適、抗病等特性的親本被集中應用,在原品種基礎上稍作修改的派生品種越來越多,品種間的遺傳差異是肉眼所難以辨別的,這時就需要DNA來鑒定其身份了。
例如山東濟南中院受理先鋒公司告某公司生產的“費玉3號”侵犯“先玉335”品種權案,經玉米中心DNA檢測,“費玉3號”與農業部“先玉335”標準樣品比較,在40個位點上位點差異為1,被告未提出有利證據證明不是同一品種,判決被告停止侵權并賠償原告經濟損失。
“依據玉米DNA指紋檢測標準,如果差異位點數≥2,證明為不同品種;差異位點數≤1,則證明品種相同或高度近似。”趙久然說,“這其中是留有框量的,但是基本不給‘仿冒套’鉆空子的余地。”
不是隨便“抓一把”
玉米有30億個堿基對,憑什么僅靠目前的40個位點檢測結果,就能判斷清楚?
對此,趙久然說,這40個位點不是隨便“抓一把”。2001年起確立了核心引物組合法的品種鑒定方案,從2001年~2005年,經過4年多系統篩選和重新設計,形成了一套共40個位點適于玉米品種鑒定的SSR(簡單重復序列)引物組合,這些位點都存在等位基因,在不同品種間存在著明確的差異,這些差異組合就可以組合出巨大的天文數字。在此基礎上研制出國內首個和唯一的適合玉米品種真實性檢測的的DNA指紋復合擴增試劑盒專利產品。利用這套引物,僅玉米中心就開展了近5萬份樣品的真實性檢測,充分檢驗了40個引物的有效性。
SNP(單核苷酸多態性)技術是否就此取代了SSR技術在DNA身份鑒定測試中的應用?
“實際上是推廣一代,研究一代。”趙久然說,每種標記技術都在特定時期內對品種檢測工作發揮一定作用,其中SSR和SNP由于均為共顯性遺傳、染色體定位清楚、具有高通量自動化的潛力而被UPOV的BMT分子測試指南推薦作為品種鑒定和數據庫構建的優選標記。趙久然認為,兩種標記技術均是比較適合品種指紋分析的標記,其中SSR標記可以滿足大部分樣品快速低成本的進行真實性檢測的要求,而SNP標記可以對其中鑒別困難的派生品種進行精細鑒別,兩種標記技術各自具備優缺點,可優勢互補,未來將長期并存應用。